Práctica 8: Técnicas de siembra

TÉCNICAS DE SIEMBRA

Objetivo:

Comparar la unidad práctica de cada uno de los métodos de siembra con respecto al crecimiento observado tanto en medio sólido como en medio líquido.

Fundamento:

La siembra es el paso de una muestra microbiana a un medio de cultivo, ya sea líquido o sólido. Toda siembra, inoculación o resiembra se puede realizar de diferentes formas según las características de la muestra. La siembra se puede realizar en medios líquidos y en medios sólidos.

Material:

- Muestra problema

- Asa de siembra, escobillón o hisopo

- Gradilla

- Mechero Bunsen

Procedimiento de siembra en medio líquido

- Si se realiza con el asa de siembra, esta se carga con la muestra problema sólida o líquida en condiciones de esterilidad y se adiciona al medio líquido agitandola.

- Si se realiza con pipeta, se toma un volumen de muestra problema y se vierte en el medio de cultivo líquido agitandose hasta su homogeneización.

- Si se realiza con escobillón o hisopo el método es igual que con el asa de siembra

Procedimiento de siembra en medio sólido

- Siembra por agotamiento de asa en estrias

1. Se toma muestra problema con el asa de siembra previamente estéril y dicho inóculo se depositará en el extremo superior de la placa, extendiéndose de un extremo a otro de esta.

2. Flameamos el asa de siembra y giramos ligeramente la placa repitiendo el proceso anterior que nos permitirá arrastrar la muestra desde uno de los bordes donde quedó la muestra hasta el otro extremo superior de la placa.

3. Se vuelve a flamear el asa sin coger muestra (como en el caso anterior) y siguiendo la misma dirección se repite la operación hasta un total de 4 o 5 veces.

4. El último tramo se realiza hacia el interior de la placa.

- Siembra por agotamiento de asa en zigzag

1. Se toma muestra problema con el asa de siembra previamente estéril y dicho inóculo se depositará en el extremo superior de la placa, extendiéndose de un extremo a otro de esta hasta ocupar un tercio de su superficie

2. Sin flamear el asa de siembra, giramos ligeramente la placa repitiendo el proceso anterior.

3. Siguiendo la misma dirección se repite la operación de nuevo.

4. El último tramo se realiza hacia el interior de la placa.

Las líneas no se tocan entre ellas

- Siembra mediante la técnica de los 4 cuadrantes:

1. Con un rotulador se dibujan dos lineas perpendiculares que deberán cruzarse en el centro de la placa, de tal forma que esta quede dividida en 4 cuadrantes.

2. Se toma con el asa de siembra estéril una cantidad de inóculo y se adicionará en el extremo superior de uno de los cuadrantes extendiendose por todo ese cuadrante en forma de zig-zag.

3. Realizamos la misma operación sin flamear en todos los demás cuadrantes siguiendo un orden de tal forma que iremos arrastrando el microorganismo problema.

Resultados:

- Medio líquido: Un organismo se disemina de la linea de inoculación a toda la masa de Agar hasta la pared del tubo de ensayo, con lo que se produce turbidez en el medio de cultivo.

- Medio sólido por agotamiento: El resultados serán colonias cada vez más separadas como consecuencia de que cada vez se va arrastrando y separando más la muestra.

- Medio sólido por técnica de 4 cuadrantes: En cada cuadrante se observarán las colonias más y más aisladas, por lo que en el cuarto cuadrante es dónde se observarán las colonias más aisladas o separadas.