Práctica 3: Preparación de medios de cultivo

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

OBJETIVO

Vamos a explicar la preparación de medios de cultivo en tubo inclinado, en placa de Petri y en tubos de ensayo. Prepararemos 250 ml de caldo nutritivo.

FUNDAMENTO

El medio de cultivo es lo que proporciona los nutrientes necesarios a los microorganismos. Su composición dependerá de la especie que se quiera cultivar, ya que cada una necesitará ciertos nutrientes. Existen microorganismos poco exigentes que son capaces de crecer bien en medios de laboratorio normales, y también existen microorganismos muy exigentes que necesitarán sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer.

MATERIAL

- Probeta
- Agua destilada
- Placas de Petri
- Vidrio de reloj
- Mechero Bunsen
- Autoclave
- Microondas
- Frasco de cristal con rosca
- Papel de filtro
- Pipeta
- Cremallera
- Tubos de ensayo
- Microondas
- Gradilla
- Varilla
-Embudo
- Caldo nutritivo

PROCEDIMIENTO:

1. Preparamos placas de Petri con  caldo nutritivo. En el bote del caldo nutritivo pone que son 8 gramos por litro, por lo que pesamos 2 gramos en un vidrio de reloj, ya que vamos a preparar 250ml.

2. Preparamos una probeta con 250ml de agua destilada.

3. Echamos el agua y el polvo de caldo nutritivo en un frasco. Vamos echando primero agua y luego polvo del caldo con ayuda de un embudo. Removemos con la varilla hasta que quede una mezcla homogénea y lo metemos al microondas hasta que alcance su punto de ebullición.

Si lo queremos hacer en tubos de ensayo, tras calentar el frasco debemos echar el caldo nutritivo en los tubos. Nosotros hemos echado 7ml en cada tubo de ensayo con la ayuda de una pipeta de 10ml. 

Si queremos hacerlo en tubo inclinado, cogemos tubos de ensayo largos y los llenamos con 10 ml cada uno con ayuda de una pipeta de 10 ml. 

4. Metemos el frasco o los tubos con tapón en el autoclave para esterilizarlo.

5. Dejamos que se enfríe un poco el caldo. En el caso de los tubos de ensayo, los metemos al frigorífico. Apilamos las placas de Petri que queremos llenar.

6. A continuación nos colocamos un guante que resista la temperatura del bote de cristal y tubos de ensayo para no quemarnos. Encendemos el mechero bunsen y comenzamos a echar caldo en las placas de Petri, esterilizando la boca del bote de cristal cada 2 placas de Petri que llenemos de caldo nutritivo. No tiene que empañarse.

Otra opción es hacerlo en la cabina de flujo laminar. Aquí las placas no se contaminan.

La cabina se enchufa 10min antes de empezar a trabajar. La luz UV descontamina la superficie, hay que ponerla al encenderla al principio del día y al apagarla al final del día, hay que tener cuidado y no trabajar con la luz UV puesta,  ya que se irrita la retina. Asegurarnos siempre de trabajar con la luz blanca. Descontaminamos la superficie de la cabina con algodón y alcohol,  antes y después de terminar de utilizarla. Abrimos las placas de Petri dentro de la cabina y empezamos a llenarla con el frasco de caldo de cultivo. 

Placas de Petri con caldo de cultivo en cabina de flujo laminar

Si lo hacemos en tubo inclinado, dejamos los tubos inclinados mas o menos 30°, no pueden moverse, deben mantenerse estables.