Práctica 2: Tinción vital

Tinción vital

Objetivo: 

Observar microorganismos en una muestra de actimel realizando tinción con una preparación de 50 ml de azul de metileno 1:10000

Fundamento: 

Es un método de tinción que se usa para que células y estructuras adquieran contraste y puedan ser observadas. Nosotros queremos observar microorganismos vivos. Para conseguir el efecto deseado, se utiliza en disoluciones muy diluidas pues son sustancias muy tóxicas para los microorganismos. No es diferencial, cuando se usa el azul de metileno para teñir a los microorganismos, todos estos se tiñen por igual, se comporta de la misma manera con todos ellos.

Material:

⦁ Papel de filtro

⦁ Asa de siembra

⦁ Mechero Bunsen

⦁ Micropipeta

⦁ Azul de metileno

⦁ Embudo

⦁ Gradilla

⦁ Agua destilada

⦁ Actimel

⦁ Tubo de ensayo

⦁ Matraz aforado

⦁ Pipeta Pasteur

Procedimiento:

1.    Preparamos el material en el banco de trabajo, incluida la muestra de actimel en un tubo de ensayo.

2.    Introducimos agua destilada en un matraz aforado

3.    Cogemos 100 micro litros de azul de metileno con la micropipeta y los añadimos al matraz aforado.

4.    Con ayuda de un embudo, se completa el matraz aforado con agua destilada hasta llegar a los 50 ml.

5.    Colocamos una gota de suero salino en el porta con ayuda de una jeringa.

6.    Encendemos el mechero Bunsen para descontaminar el asa de siembra y crear un ambiente estéril. El asa la pasamos por la llama azul hasta que quede de color rojo vivo.

7.    Cogemos un inoculo de Actimel, lo colocamos en el portaobjetos y homogeneizamos.

8.    Colocamos una gota de azul de metileno con una pipeta Pasteur, volvemos a homogeneizar y extendemos por todo el porta.

9.    Ya tenemos nuestra muestra lista para ir a observarla al microscopio.

Resultados:

Los microorganismos se visualizarán vivos y ligeramente coloreados de rojo, en el caso de haber utilizado como colorante el rojo neutro, y de color azul, en el caso de azul de metileno. Este último será nuestro caso, aunque no hemos conseguido distinguir bien a los organismos vivos.